MicroRNA-146a ist reichlich in der extrazellulären Vesikeln freigesetzt durch Osteoklasten

An der 45th Annual Meeting & Exhibition der American Association for Dental Research, Forscher Lexie Holliday, University of Florida, Gainesville, USA, präsentierte eine Studie mit dem Titel „MicroRNA-146a ist Reichlich in der Extrazellulären Vesikeln Freigesetzt durch Osteoklasten.“ Der AADR-Jahresversammlung fand in Verbindung mit dem 40. Jahrestagung der Canadian Association for Dental Research.

Die jüngsten Daten aus Holliday und Ihr team von Forschern zeigt, dass extrazelluläre Vesikel (EVs) veröffentlicht von Osteoklasten regulieren, Knochen-Zellen in vitro. MicroRNAs sind kleine, nicht-kodierende RNAs, die Stille translation von Ziel-mRNAs. EVs können shuttle-funktionale microRNAs aus Ihrer Zelle von Ursprung zu Ziel-Zellen. MicroRNA (miR)-146a ist, die durch NF-kappa-B und unterdrückt NF-Kappa B signaling durch die Hemmung der übersetzung von TRAF6 und IRAK1. Osteoklasten benötigen Konstante NF-Kappa B signaling, zu differenzieren und resorbieren den Knochen. In dieser Studie, die Forscher gezielt zu identifizieren microRNAs in Osteoklasten-abgeleitet EVs zu identifizieren, die potentielle Regulatoren des Knochen-remodelling.

In dieser Studie, Osteoklasten produziert wurden durch Stimulation von RAW 264.7 Zellen mit rekombinanten Rezeptor Activator of Nuclear Factor kappa B-Ligand. EVs wurden isoliert mit ExoQuickTM, positiv – /negativ-gefärbt und visualisiert durch Transmissions-Elektronen-Mikroskopie (TEM) und getestet durch Western-blotting für standard-exosomal Marker. MicroRNAs von Osteoklasten und Osteoklasten-Vorläufer isoliert wurden, mit dem miRVana kit und ein Profil von microarray. RNA wurde isoliert aus EVs mit SeraMiR Exosome RNA Purification kit und der quantitativen real-time-PCR wurde durchgeführt.

EVs wurden überwiegend zwischen 30-70 nm Durchmesser TEM und exosome enthalten Marker CD63 und CD81. Die Microarray-Analyse zeigte, dass, Let-7b-5p und miR-146a wurden bei 160% und 210% höheren Ebenen in Osteoklasten als Vorläufer. Im Gegensatz MiR-689 und miR-290 wurden reduziert auf 15% und 3% Ihrer Vorläufer Ebene in Osteoklasten. Sehr wenig miR-689-oder miR-290 erkannt wurde und Evt. Let-7b-5p erhöht 2-fache im Osteoklasten. MiR-146a war sehr reichlich in EVs und war auf einer 21,1-Fach höheren Ebene in der EVs von Osteoklasten im Vergleich mit Vorstufen. MiR-146a ist angereichert EVs von Osteoklasten.

Die Version von miR-146a im EVs kann verhindern, dass die repression der NF-kappa B-Signalweg in Osteoklasten. MiR-146a-EVs reichen kann regulieren Osteoblasten oder andere Zielzellen. MiR-146a im EFD ist ein potentieller biomarker für die Präsenz von Osteoklasten.

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